Tip:
Highlight text to annotate it
X
I fase fire, vil vi vende vores indledende tværbinding proteiner til DNA, efterfulgt af
oprensning af DNA'et. Start med at tage hver IP prøve samt input prøve, der
ikke gik igennem de foregående IP trin og tilføje 8 mikroliter 5 M natrium
chlorid til 200 mikroliter prøver efterfulgt af vortexing.
Inkuber ved 95 ° C i 15 minutter. For at oprense hver prøve vil vi bruge en DNA-bindende silicasøjler ifølge
til producentens instruktioner. Første tilføje hver prøve for de rette mængder
DNA bindingspuffer i hvirvlen, overfører derefter hver prøve til en kolonne anbragt inde i en
opsamlingsrør. Centrifuger kolonnerne ved 15.000 g i 1 minut.
Kassér gennemstrømningen fra opsamlingsrøret og tilføje DNA-vaskepuffer til hver søjle.
Centrifuger af kolonnerne ved 15000g i et minut. Kassér gennemstrømningen fra opsamlingsrøret
og spinde de tomme kolonner på 15000g i to minutter for at sikre, sikre, at de er helt tørre.
Kassér det gamle opsamlingsrør og placere oprensningssøjle i et nyt rent rør.
Tilsættes 50 mikroliter DNA elusion puffer direkte til membranen i kolonnen.
Lad det sidde i et minut og derefter udføre en slutcentrifugering ved 15000g i 1 minut.
Kassér oprensningssøjle og gemme det oprensede DNA ved -20 ° C indtil parat til den sidste fase.