Tip:
Highlight text to annotate it
X
I dag to af vores ICC procedure vil vi tilføje vores sekundært antistof, udføre
en valgfri dobbelt mærkning og nuklear mærkning trin,
montere vores dækglas til dias, og få billeder af vores antistoffer med
et fluorescerende mikroskop.
Første
Vi aspireres off primære antistoffer opløsning således ved vask af cellerne
tre gange med PBST i fem minutter hver.
Næste forberede floraform konjugeret sekundært antistof, som vil binde til
det primære antistof.
Fortynd den sekundære blokeringspuffer
på tempelanbefaling fortynding angivet på dataarket
og inkuber ved stuetemperatur i en time.
Dækker pladerne med folie forhindrer følsomme farvestoffer fra nedværdigende.
Aspirer fra det sekundære antistof opløsningen efterfulgt af vask af cellerne
tre gange med PBST
i fem minutter hver.
Som et valgfrit trin en separat primær og sekundær par kan anvendes
at visualisere et andet epitop ved hjælp af en anden etage for det.
Desuden kan DNA-bindende farvestoffer såsom DAPI anvendes uden behov for
sekundære antistoffer.
Se den fulde skriftlige Novus protokol for at få instruktioner om, hvordan at fordoble og
tredobbelt mærkning.
Dækglas er nu klar til at blive monteret på mikroskopobjektglas.
Tag en ren rutsjebane og dispensere en dråbe antiblegemiddel monteringsmedium ved langsomt
opkald stemplet ned af pipetten.
Fjern forsigtigt et dækglas fra brønden,
så overskydende vask for at dryppe
og placere cellerne står ned på diaset.
Klar fingernegl politurer kan anvendes til at forsegle dækglasset og forhindre den i
udtørring.
Objektglassene kan nu visualiseres under et mikroskop eller opbevaret ved -20
eller 4 grader celsius i en mørk slide boks eller slide bog.
Begrænse mængden af tid hver dias udsættes for mikroskopets lys vil aide
til forlængelse af fluorescerende signal
og forhindre fotoblegning.